對(duì)于胰酶HyClone的使用，使用者需要注意些什么？ 胰酶HyClone是一種自豬胰中提取的多種酶的混合物，主要為胰蛋白酶(將蛋白質(zhì)消化成蛋白胨)、胰淀粉酶(將淀粉消化成糖)與胰脂肪酶(將脂肪消化成甘油和脂肪酸)。其通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞間結(jié)合處蛋白降解，這時(shí)細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力作用下成為球形，從而使細(xì)胞分開。
不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力zui強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。
胰酶HyClone使用注意
1.在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌、支原體污染。
2.胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長(zhǎng)，過長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況較差。
貼壁細(xì)胞的消化
1.吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的死細(xì)胞/血清。
2.加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過細(xì)胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量，室溫放置2-5分鐘(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)。
3.顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯皺縮成圓形，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者在瓶壁上有部分成點(diǎn)狀區(qū)域細(xì)胞脫落;或者用手拍打克氏瓶正好能夠使細(xì)胞脫落;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。
4.此時(shí)加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液停止消化，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會(huì)降低胰酶活力。因此，胰酶HyClone溶液常用無Ca2+、Mg2+的D-Hanks’平衡鹽溶液配制成0.25%溶液。消化細(xì)胞時(shí)，加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液，或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的消化作用。
