木聚糖是一種存在于植物細(xì)胞壁中的多糖類物質(zhì)，是植物半纖維素的主要成分。
木聚糖酶分布廣泛，可以從動(dòng)物、植物及微生物體內(nèi)獲得。
檢測(cè)原理：
木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖，具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下，能夠和DNS試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。
通過反應(yīng)溶液的顏色的變化，來確定還原糖的含量。
因?yàn)檫€原糖的生成量和反應(yīng)液的木聚糖活力是成正比的，通過分光光度法可以測(cè)定，計(jì)算出樣品中的木聚糖酶活力。
檢測(cè)所用的試劑：
乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。
所需要的儀器設(shè)備：
碾缽、分樣篩、分析天平、pH計(jì)、磁力攪拌器、電磁振蕩器、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)等。
標(biāo)準(zhǔn)曲線：
吸取乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4ml，加入DNS試劑5ml，沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，用水定容至25ml，制成標(biāo)準(zhǔn)空白樣。
分別吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，加入緩沖溶液定容至100ml，配制成0.1-0.7mg/ml的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
按照上述的標(biāo)準(zhǔn)溶液配制，分別做2次平行。吸取木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml，分別加入2ml水和5mlDNS試劑。
電磁振蕩3s，沸水加熱5min，用自來水冷卻至室溫，用水定容至25ml。
以標(biāo)準(zhǔn)空白樣作為對(duì)照，在540nm處測(cè)吸光度OD值。
以木糖濃度為Y軸，吸光度OD值為X軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測(cè)過程：
吸取10ml木聚糖溶液，37℃平衡10min。
吸取10ml經(jīng)過稀釋的木聚糖酶溶液，37℃平衡10min。吸取2ml平衡過的木聚糖酶液，加入5mlDNS試劑，電磁振蕩3s。
加入2ml木聚糖溶液，37℃保溫30min。沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25ml，電磁振蕩3s。
以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對(duì)照，在540nm處測(cè)定吸光度。以同樣的方法，加入2ml的木聚糖酶，電磁振蕩3s，37℃精確保溫30min，加入5mlDNS試劑，電磁震蕩3s，以終止酶解反應(yīng)。
沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25ml，振蕩3s，以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對(duì)照，在540nm處測(cè)定吸光度。
400-0918-500
