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如何檢定TCB血清的質(zhì)量?
  • 發(fā)布日期:2022-11-27      瀏覽次數(shù):577
    •   1、如何儲存和解凍TCB血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
        將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
        長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。
        我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
        2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
        沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
        3、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
        按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
       ?。?)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
       ?。?)血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
       ?。?)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
       ?。?)勿將TCB血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
       ?。?)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
       ?。?)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
        4、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
        一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
        5、為什么要熱滅活血清?
        加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
        6、有必要做熱滅活嗎?
        實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
        若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!
        在此,我們解析血清的質(zhì)量標準:
        1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
        2、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
        3、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
        4、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。
        5、對細胞有良好的支持繁殖作用。
        6、TCB血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
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