卵內(nèi)儲存的營養(yǎng)物質(zhì)，主要由清蛋白、球蛋白、磷蛋白、卵磷脂及一些酶等組成，在胚胎發(fā)育過程中起著積極作用。鳥類、兩棲類和大多數(shù)魚類的卵黃發(fā)生有兩種來源：一是由卵母細(xì)胞本身合成，稱內(nèi)源性卵黃；一是由卵母細(xì)胞以外的組織細(xì)胞合成，稱外源性卵黃，如脊椎動物由肝臟合成卵黃前體，再輸送至卵巢，由卵母細(xì)胞攝入。
作用
通過免疫注射產(chǎn)蛋雞，即可由其生產(chǎn)的蛋黃中提取相應(yīng)的抗體，并可用于相應(yīng)疾病的預(yù)防和治療，這類制劑稱為卵黃抗體。卵黃抗體在臨床上應(yīng)用較為廣泛，其優(yōu)點是雞蛋比動物血清更容易獲得，且卵黃中抗體含量較高。禽類的免疫器官法氏囊主要控制機體的體液免疫，機體的免疫應(yīng)答發(fā)生后，體液中成熟的骨髓依賴性淋巴細(xì)胞受相關(guān)免疫信號通路的介導(dǎo)，分化為漿細(xì)胞，隨即產(chǎn)生大量抗體釋放入血液中。血液中的大量抗體逐漸轉(zhuǎn)移入卵黃中，并適量地蓄積。收集到的卵黃抗體，即為通過同一抗原反復(fù)刺激后產(chǎn)生的多克隆抗體。卵黃中主要的免疫球蛋白為IgY，其功能與作用類似于哺乳動物血清中的IgG。雞lgY的分子量約180k Da，由兩條輕鏈和兩條重鏈組成，分子量分別為60~70k Da和22~30k Da，等電點約為5.2。IgY具有較強的耐熱、耐酸、抗離子強度和一定的抗酶解能力。
卵黃中的主要成分是蛋白質(zhì)和脂肪，其比例為1:2。大部分蛋白質(zhì)都是脂蛋白，存在于卵黃顆粒中，不溶于水，只有卵黃球蛋白（α、β、γ）是水溶性的，而IgY是γ卵黃球蛋白。因此lgY的分離純化首先需要有效地去除卵黃中的脂類，從水溶性蛋白中分離IgY。目前已建立了諸如PEG、硫酸葡聚糖、天然膠，如海藻酸鈉、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步純化蛋白質(zhì)。
實驗材料
1.健康產(chǎn)蛋雞（最好是SPF雞）、免疫抗原（如雞新城疫滅活疫苗）、弗氏佐劑。
2.滅菌生理鹽水或0.01mol/L pH7.2 PBS、海藻酸鈉、飽和硫酸銨等。
3.毛細(xì)滴管、注射器、碘酊棉、酒精棉、燒杯、玻璃棒、離心管、pH試紙等。
4.微量振蕩器、離心機、分光光度計等。
操作方法
1.實驗動物的選擇：選擇健康、產(chǎn)蛋率高的蛋雞，購進(jìn)后飼養(yǎng)1周左右，觀察其健康情況。
2.抗原的準(zhǔn)備：免疫抗原有多種選擇，一般采用滅活的病原體，也可以選擇激素類、蛋白類物質(zhì)，使用前可以選用弗氏*佐劑乳化抗原。
3.動物免疫：免疫方式主要有口鼻接種、皮內(nèi)接種、皮下接種、肌肉注射、腹腔注射以及靜脈注射。禽類的免疫方式多用肌肉注射，接種中采用胸肌多點注射。使用弗氏*佐劑充分乳化抗原。以商用雞新城疫滅活苗免疫為例，首.次免疫的劑量可以控制在1~2 mL，抗原含量為0.3-0.5 mg/kg（30日齡的蛋雞免疫劑量為0.4 mg/次）2周后進(jìn)行2次免疫，4周后第3次免疫之后每隔1個月可加強免疫1次。
4.免疫雞血清抗體效價檢測：一般使用瓊脂免疫擴散實驗檢測免疫雞血清中的抗體效價。將免疫蛋雞所用的抗原滴加于抗原孔，免疫雞血清滴加于抗體孔?？乖着c抗體孔之間出現(xiàn)沉淀線者，為陽性。最高稀釋倍數(shù)血清孔出現(xiàn)沉淀線，即為該血清的抗體效價。一般效價達(dá)到1:64以上時，可開始收集免疫蛋雞所產(chǎn)雞蛋。
5.收集卵黃抗體：先用清潔水洗去蛋殼表面的糞污，再使用碘酊和酒精消毒。無菌條件下打開胚殼，傾出蛋黃至滅菌大燒杯中，以1:9的比例加入滅菌生理鹽水或0.01 mol/L pH7.2 PBS稀釋并充分混勻，調(diào)節(jié)pH至5.2，勻漿后的卵黃抗體可以進(jìn)一步提純，也可加入0.01%硫柳汞或每毫升卵黃液加入青.霉素、鏈.霉素各1000單位進(jìn)行防腐抑菌，搖勻后分裝于消毒好的瓶中，冷凍干燥保存或制成干粉利用。
6.IgY的純化：卵黃混合液反復(fù)凍融3次，6000 r/min離心30 min，分離出卵黃蛋白，加入終濃度0.07%的海藻酸鈉和0.02%的NaCl，振蕩，使海藻酸鈉充分溶解，靜置30 min，6000 r/min離心30 min，上清液調(diào)節(jié)pH到7.2，再依次用50%、33%、3%的飽和硫酸銨（pH 7.2）提取IgY，用 SephadexG-25脫鹽。
結(jié)果判定
對獲得的卵黃抗體進(jìn)行的效價及活性測定，可采用免疫電泳實驗、瓊脂免疫擴散實驗、血凝抑制實驗、酶聯(lián)免疫吸附實驗等多種抗體檢測方法。
