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如何把細(xì)胞鋪均勻?
  • 發(fā)布日期:2021-06-09      瀏覽次數(shù):1753
    • 做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是最常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了。但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是均勻: 要么中間密周?chē)?,要么周?chē)苤虚g禿頂。

      一般 96 孔板每孔是加 100 微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入。加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下,再繼續(xù)加剩余的半邊板子。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣。

      注意把握力度(一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。

      6 孔板、12 孔板或 24 孔 板,均采用將第一個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基,晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底。然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤(rùn)孔底。其它孔一次類(lèi)推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底。

      加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。

      這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒(méi)有 96 孔板好掌握,效果沒(méi)有 96 孔板好,所以放棄改用浸潤(rùn)孔底的方法。

      細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對(duì)著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之分散。

      如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),就是振幅小,頻率高的那種。

      細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,要充分懸浮!還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,是要晃得?;蔚臅r(shí)候最好不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會(huì)不均勻。

      一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后,正常處理,在培養(yǎng)瓶里吹勻。然后鋪 6 孔板,每孔 2 毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭。然后放到培養(yǎng)箱里,輕微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈?;旧?24 小時(shí)之后觀察每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。

      計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫 8 字型晃。顯微鏡下觀察,如果不均勻,按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過(guò)程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈。

      放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向5到6次,但關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過(guò)多的運(yùn)動(dòng),例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了。

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